目錄
前言
上篇 概述 1
1 口蹄疫病毒基因組基本結(jié)構(gòu)及其分子生物學(xué)特征 2
1.1 口蹄疫概述 2
1.2 口蹄疫流行概況 3
1.3 口蹄疫病毒分類及結(jié)構(gòu) 6
1.4 口蹄疫病毒基因組基本結(jié)構(gòu) 8
1.5 口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白主要功能 9
1.6 口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白主要功能 10
1.7 阿克蘇（Akesu/O/58）口蹄疫病毒基因組結(jié)構(gòu)及特點(diǎn) 11
參考文獻(xiàn) 12
2 口蹄疫疫苗研究進(jìn)展 17
2.1 口蹄疫傳統(tǒng)疫苗 17
2.1.1 FMD弱毒疫苗 18
2.1.2 FMD滅活疫苗 18
2.2 口蹄疫新型疫苗 19
2.2.1 FMD基因工程亞單位疫苗 20
2.2.2 FMD合成肽疫苗 22
2.2.3 FMD融合蛋白疫苗 23
2.2.4 FMD核酸疫苗 24
2.2.5 FMD重組活載體疫苗 26
2.2.6 FMD基因缺失疫苗 27
2.2.7 FMD反向遺傳疫苗 27
2.3 免疫效果和水平監(jiān)測(cè) 28
參考文獻(xiàn) 29
3 植物反應(yīng)器生產(chǎn)醫(yī)用蛋白的研究進(jìn)展 34
3.1 轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)疫苗的基本流程和表達(dá)系統(tǒng) 34
3.2 轉(zhuǎn)基因植物疫苗的研究概況 35
3.3 轉(zhuǎn)基因植物疫苗的臨床應(yīng)用 36
3.4 轉(zhuǎn)基因植物抗體的研究概況 37
3.5 轉(zhuǎn)基因植物抗體的臨床應(yīng)用 38
3.6 轉(zhuǎn)基因植物藥用蛋白的研究概況 39
3.7 生物安全性評(píng)價(jià) 39
3.7.1 對(duì)健康的影響 40
3.7.2 對(duì)環(huán)境和生態(tài)的影響 40
3.7.3 轉(zhuǎn)基因植物的檢測(cè) 41
參考文獻(xiàn) 42
4 口蹄疫轉(zhuǎn)基因植物疫苗的研究 47
4.1 國(guó)外研究概況 47
4.2 國(guó)內(nèi)研究概況 48
4.2.1 口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)基因P1在馬鈴薯中的轉(zhuǎn)化與表達(dá) 48
4.2.2 口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)基因P1在玉米中的轉(zhuǎn)化與表達(dá) 50
4.2.3 口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)基因P1在水稻中的轉(zhuǎn)化與表達(dá) 51
4.2.4 口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)基因VP1在熱帶牧草柱花草中的轉(zhuǎn)化與表達(dá) 52
4.2.5 口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)基因在豆科植物中的轉(zhuǎn)化與表達(dá) 54
參考文獻(xiàn) 58
下篇 實(shí)驗(yàn)操作 61
5 阿克蘇（Akesu/O/58）FMDV結(jié)構(gòu)基因VP1和P1的克隆與核苷酸序列分析 62
5.1 目的 62
5.2 基本原理與技術(shù)路線 62
5.3 材料與方法 62
5.3.1 材料 62
5.3.2 方法 63
5.4 結(jié)果 67
5.4.1 目的基因的獲得 67
5.4.2 目的基因的克隆與鑒定 68
5.4.3 目的基因的核苷酸和氨基酸序列 69
5.5 討論 69
5.6 結(jié)論 71
參考文獻(xiàn) 71
6 植物雙元表達(dá)載體的構(gòu)建 73
6.1 目的 73
6.2 基本原理與技術(shù)路線 73
6.3 材料與方法 73
6.3.1 材料 73
6.3.2 方法 74
6.4 結(jié)果 80
6.4.1 目的基因的擴(kuò)增 80
6.4.2 中間表達(dá)載體的鑒定 80
6.4.3 目的基因核苷酸序列測(cè)定與分析 81
6.4.4 植物雙元表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定 82
6.5 討論 82
6.6 結(jié)論 84
參考文獻(xiàn) 84
7 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的阿克蘇（Akesu/O/58）FMD結(jié)構(gòu)基因VP1在煙草中的轉(zhuǎn)化與表達(dá) 85
7.1 目的 85
7.2 技術(shù)路線 85
7.3 材料與方法 85
7.3.1 材料 85
7.3.2 方法 86
7.4 結(jié)果 91
7.4.1 轉(zhuǎn)化植株的抗性篩選和抗性植株的獲得 91
7.4.2 目的基因和選擇性報(bào)告基因的PCR檢測(cè) 92
7.4.3 目的基因和選擇性報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè) 93
7.4.4 目的基因的DNA點(diǎn)雜交和PCR-Southern印跡 95
7.4.5 目的基因的表達(dá) 95
7.5 討論 96
7.6 結(jié)論 98
參考文獻(xiàn) 99
8 阿克蘇（Akesu/O/58）FMDV VP1基因在兩種豆科牧草中的轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)基因植株的獲得 101
8.1 目的 101
8.2 基本原理與技術(shù)路線 101
8.3 材料與方法 101
8.3.1 材料 101
8.3.2 方法 102
8.4 結(jié)果 104
8.4.1 組織培養(yǎng)觀察 104
8.4.2 雙元表達(dá)載體的鑒定 105
8.4.3 轉(zhuǎn)化植株的篩選和抗性植株的獲得 105
8.4.4 目的基因和選擇性報(bào)告基因的PCR檢測(cè) 107
8.4.5 目的基因和選擇性報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè) 108
8.4.6 目的基因DNA點(diǎn)雜交和PCR-Southern印跡 109
8.4.7 目的蛋白的Western Blot檢測(cè) 110
8.5 討論 111
8.6 結(jié)論 112
參考文獻(xiàn) 112
9 FMDV VP1 轉(zhuǎn)基因煙草對(duì) Balb/C小鼠免疫效果的研究 114
9.1 目的 114
9.2 技術(shù)路線 114
9.3 材料與方法 114
9.3.1 材料 114
9.3.2 方法 115
9.4 結(jié)果 116
9.4.1 血清抗體的檢測(cè) 116
9.4.2 病毒的乳鼠半數(shù)致死量 117
9.4.3 病毒血癥試驗(yàn) 117
9.4.4 攻毒保護(hù)率 117
9.5 討論 118
9.6 結(jié)論 120
參考文獻(xiàn) 121
10 口蹄疫轉(zhuǎn)基因植物疫苗研究總結(jié)與展望 123
10.1 口蹄疫轉(zhuǎn)基因植物疫苗研究總結(jié) 123
10.1.1 目的基因的選擇 123
10.1.2 轉(zhuǎn)化受體植物的選擇 125
10.1.3 轉(zhuǎn)基因方法的選擇 126
10.1.4 口蹄疫轉(zhuǎn)基因植物疫苗免疫效果 127
10.2 展望 128
10.2.1 獲得高效穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)化植株 128
10.2.2 提高外源基因轉(zhuǎn)化率與檢測(cè)靈敏度 129
10.2.3 提高轉(zhuǎn)基因植物疫苗的免疫效果 130
參考文獻(xiàn) 131
符號(hào)或縮略語(yǔ)說明 134
附錄 136