MicroRNAs（miRNAs）是一類長度約為22nt小分子RNA，其在多種生物學(xué)進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。乳腺細(xì)胞或乳腺的組織培養(yǎng)物是研究乳腺生理學(xué)功能的良好模型，并同樣有助于miRNA功能的研究，所以對本研究室構(gòu)建的DBMEC中microRNA進(jìn)行分析與鑒定，將是所有研究的基礎(chǔ)。首先，使用TRIzol法和聚丙烯酰胺凝膠電泳提取并分離DBMEC中的miRNA，隨后，分離的小分子RNA經(jīng)過擴(kuò)增后開始測序。通過莖環(huán)結(jié)構(gòu)及PCR驗(yàn)證試驗(yàn)確定新的NovelmiRNAs的存在。為了確定新miRNA在不同組織間的分布，本研究通過莖環(huán)RT-PCR和PCR產(chǎn)物測序方法檢測了泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺、肝臟、脂肪組織、脾臟、回腸及腎臟中新miRNA的表達(dá)。通過生物學(xué)分析，solexa測序共獲得12323451個(gè)reads，其中有效reads11979706個(gè)，9428122個(gè)reads屬于miRNAs。后續(xù)分析表明bta-mir-184表達(dá)豐度高，388個(gè)定位于典型莖環(huán)結(jié)構(gòu)的小分子能夠匹配到已知的miRNA莖環(huán)中，同時(shí)，38個(gè)定位于新莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA被確定為是新的miRNA。新miRNA中的一種，bta-U21在泌乳中期奶牛中是乳腺特有的，7個(gè)新miRNA，包括bta-U21在內(nèi)，表現(xiàn)出組織分布的局限性?！赌膛Ｈ橄賛icroRNA研究進(jìn)展》正式基于奶牛乳腺microRNA研究基礎(chǔ)，將這些研究匯總，并進(jìn)行梳理總結(jié)，形成奶牛乳腺microRNA的前沿內(nèi)容。以便研究人員了解和參考使用。

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