序
前言
第一篇 基本操作篇
第一章 緒論
第一節(jié) 基因操作技術(shù)
第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則與安全
第二章 儀器操作與溶液配制
第一節(jié) 常用器皿與儀器
第二節(jié) 溶液
第三章 大腸桿菌培養(yǎng)與保存
第一節(jié) 培養(yǎng)前準(zhǔn)備
第二節(jié) 大腸桿菌培養(yǎng)
第三節(jié) 大腸桿菌菌株保存
第四章 基因操作中的酶學(xué)反應(yīng)
第一節(jié) 常用酶的選購(gòu)與保存
第二節(jié) 限制性?xún)?nèi)切核酸酶
第三節(jié) 限制性?xún)?nèi)切核酸酶消化DNA實(shí)驗(yàn)
第四節(jié) DNA作圖
第五節(jié) 連接酶
第六節(jié) 其他核酸酶
第五章 電泳技術(shù)
第一節(jié) 基本原理
第二節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳
第三節(jié) 從瓊脂糖凝膠中回收DNA
第四節(jié) 聚丙烯酰胺凝膠電泳
第五節(jié) 從聚丙烯酰胺凝膠中回收DNA
第二篇 DNA篇
第六章 DNA基本操作
第一節(jié) DNA保存
第二節(jié) DNA檢測(cè)
第三節(jié) DNA濃縮
第四節(jié) DNA純化
第七章 擴(kuò)增與提取質(zhì)粒DNA
第一節(jié) 質(zhì)粒有關(guān)基本知識(shí)
第二節(jié) 質(zhì)粒DNA提取
第三節(jié) 質(zhì)粒DNA純化
第八章 DNA轉(zhuǎn)化
第一節(jié) 制備感受態(tài)細(xì)胞
第二節(jié) 轉(zhuǎn)化
第九章 擴(kuò)增與提取噬菌體DNA
第一節(jié) 噬菌體生活史
第二節(jié) 感染力測(cè)定
第三節(jié) 噬菌體回收與繁殖
第四節(jié) 提取噬菌體DNA
第十章 提取真核生物基因組DNA 與構(gòu)建基因組文庫(kù)
第一節(jié) SDS/酚法提取基因組DNA
第二節(jié) 試劑盒法提取基因組DNA
第三節(jié) CTAB法提取基因組DNA
第四節(jié) 構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)
第十一章 PCR基本操作
第一節(jié) PCR基本原理
第二節(jié) 引物設(shè)計(jì)
第三節(jié) 耐熱DNA聚合酶
第四節(jié) PCR儀
第五節(jié) PCR基本操作
第六節(jié) PCR實(shí)例
第七節(jié) 預(yù)防污染
第八節(jié) 熱啟動(dòng)
第十二章 DNA重組
第一節(jié) 重組流程
第二節(jié) 插入DNA的準(zhǔn)備
第三節(jié) 載體的準(zhǔn)備
第四節(jié) 連接
第五節(jié) 插入DNA的修飾與改造
第六節(jié) 轉(zhuǎn)化
第七節(jié) 重組子篩選
第十三章 探針制備
第一節(jié) 探針標(biāo)記法
第二節(jié) 隨機(jī)引物法
第三節(jié) 末端標(biāo)記法
第四節(jié) 探針純化
第十四章 PCR產(chǎn)物克隆
第一節(jié) PCR產(chǎn)物重組策略
第二節(jié) PCR產(chǎn)物的純化
第三節(jié) 末端平齊
第四節(jié) TA克隆
第五節(jié) 添加限制性?xún)?nèi)切核酸酶識(shí)別序列
第十五章 PCR應(yīng)用
第一節(jié) 菌落PCR
第二節(jié) 簡(jiǎn)并引物PCR
第十六章 Southern印跡
第一節(jié) DNA酶切
第二節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳
第三節(jié) 變性、轉(zhuǎn)膜與固定
第四節(jié) 雜交
第十七章 分子標(biāo)記
第一節(jié) 微衛(wèi)星標(biāo)記
第二節(jié) RFLP與RAPD
第十八章 DNA序列測(cè)定與比對(duì)
第一節(jié) 測(cè)序原理
第二節(jié) 自動(dòng)測(cè)序儀
第三節(jié) DNA序列的同源比對(duì)
第三篇 RNA篇
第十九章 RNA提取
第一節(jié) RNA實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
第三節(jié) 用AGPC法提取RNA
第四節(jié) 用NP-40法提取RNA
第五節(jié) 使用試劑盒提取RNA
第二十章 純化poly(A)+ RNA
第一節(jié) 利用oligo(dT)純化poly(A)+ mRNA
第二節(jié) 用oligo(dT)·纖維素進(jìn)行柱層析
第二十一章 構(gòu)建cDNA文庫(kù)
第一節(jié) 以質(zhì)粒為載體構(gòu)建cDNA文庫(kù)
第二節(jié) 以λ噬菌體為載體構(gòu)建cDNA文庫(kù)
第二十二章 RT-PCR
第二十三章 RACE
第一節(jié) 5'RACE
第二節(jié) 3'RACE
第二十四章 轉(zhuǎn)錄分析
第一節(jié) Northern印跡
第二節(jié) RNase保護(hù)分析
第四篇 表 達(dá) 篇
第二十五章 無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 大腸桿菌無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)
第三節(jié) 小麥胚芽無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)
第二十六章 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
第一節(jié) 表達(dá)載體結(jié)構(gòu)
第二節(jié) 表達(dá)中的問(wèn)題
第三節(jié) 表達(dá)實(shí)例與SDS-PAGE檢測(cè)
第二十七章 枯草桿菌表達(dá)系統(tǒng)
第一節(jié) 菌株與載體
第二節(jié) 轉(zhuǎn)化
第三節(jié) 蛋白質(zhì)的提取
第二十八章 放線菌表達(dá)系統(tǒng)
第一節(jié) 菌株與載體
第二節(jié) 放線菌培養(yǎng)
第三節(jié) 轉(zhuǎn)化
第四節(jié) 蛋白質(zhì)的提取
第二十九章 釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)
第一節(jié) 釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)概述
第二節(jié) 外源基因在釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)
第三十章 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)
第一節(jié) 宿主
第二節(jié) 重組
第三節(jié) 重組基因的表達(dá)
第五篇 附 錄
附錄一 儲(chǔ)液配制
附錄二 核酸及蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)
附錄三 各種識(shí)別位點(diǎn)的限制性?xún)?nèi)切核酸酶分類(lèi)表
附錄四 部分限制性?xún)?nèi)切核酸酶需要的保護(hù)堿基
附錄五 篩選重組子用的平板標(biāo)簽貼紙(Φ=9cm)
附錄六 常用DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖像示意圖
附錄七 本書(shū)作為教材的使用方法